اندازه گیری توتال کلیفرم
--------------------------------------------------------------
مواد و تجهیزات اندازه گیری
مواد مورد نیاز
محیط کشت لاکتوز براث
تجهیزات اندازه گیری:
انکوباتور
بن ماری
آون
اتوکلاو
هود لامینار
ترازو
تشریح روش انجام آزمون:
با رعایت شرایط سترونی حجم معین نمونه آب را به لوله های حاوی محیط مایع تلقیح کنید. روش های متداول MPN 3 یا 5 لوله ای است.برای مثال اگر 3 سری 3تایی لوله در نظر گرفته شود. به سری مضاعف محیط کشت 10 میلی لیتر نمونه، به سری اول محیط کشت معمولی 1 میلی لیتر نمونه و به سری دوم محیط کشت معمولی 1/0 میلی لیتر نمونه اضافه میشود.
برای سنجش کلی فرم کلی از یک محیط کشت عمومی مانند لاکتوز براث در دمای محیط 35- 37 درجه سانتیگراد استفاده میگردد. جهت تایید این مرحله به تعداد لوله های آزمایش مثبت میتوان از لوله های حاوی محیط کشت برلینت گرین استفاده نمود.
برای سنجش فکال کلیفرم از محیط کشت اختصاصی مانند محیط کشت آماده EC مدیوم در دمای محیط 44-45 درجه سانتیگراد استفاده میشود. مواد موجود در محیط کشت اختصاصی و دمای مذکور مشابه ماود ودمای موجود در روده بزرگ است.باکتری های کلیفرمهای گوارشی خود را با آن سازگاز نموده و توان رشد در ای شرایط را دراند.(شرایطی که باکتریهای غیر روده ای اکثرا قادر به رشد نیستند.
برای تایید وجود کلیفرم ها توسط حلقه کشت(قطر حلقه 3 میلی متر) یک حلقه کامل یا با پیپت سترون یک قطره از هر لوله های حاوی لاکتوز براث واکنش مثبت برداشت نموده و به لوله های حاوی محیط آبگوشت بریلینت گرین تلقیح گردد. لوله ها در دمای 35-37 درجه سانتیگراد گرمخانه گذاری نموده و پس از 48 ساعت از نظر تولید گاز بررسی شود.
محاسبات و تهیه گزارش:
شمارش کلیفرم ها بر اساس تولید گاز و جمع شدن آن در لوله های درهام می باشد. روش های MPN 3 یا 5 لوله ای را در صورت مثبت بودن می توان با جدول مقایسه نموده و در 100 میلی لیتر نتایج را گزارش نمایید. در صورتیکه نمونه مورد آزمون رقیق می شود تنها از سه حجم متوالی برای محاسبه محتمل ترین تعداد استفاده میگردد به منظور تخمین تعداد میکروارگانیسم ها در حجم مرجع (برای مثال 100 میلی لیتر) تعدا به دست آمده از جدول را در ضریب رقت مورد استفاده ضرب کنید.
محیط کشتهای آلوده پس از بررسی توسط اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد و فشار یک اتمسفر استریل و سپس دور ریخته می شود.
مراجع و مستندات مرتبط:
سازمان محیط زیست
